活檢培養(yǎng)液是用于預(yù)植入遺傳診斷(PGD/S)的早期胚胎的卵裂球活檢。
使用方法:
第2天(收集卵后 2 天)
1.將 1-2mL 活檢培養(yǎng)基置于培養(yǎng)皿中,用預(yù)平衡的液體石蠟覆蓋,并在 5-6%CO2 環(huán)境中平衡至 37℃,至少 2 小時(shí)。
第3天(胚胎活檢日)
1.在受精后第 3 天早晨,進(jìn)行早期胚胎活檢。
2.活檢前半小時(shí),為每個(gè)胚胎準(zhǔn)備活檢盤。用 10×10μL 活檢培養(yǎng)基沖洗吸頭的尖端。吸取三滴活檢培養(yǎng)液和一滴 精子顯微操作液。
3.立即用 4mL 預(yù)平衡的石蠟油覆蓋培養(yǎng)皿,以避免蒸發(fā),并將制備的培養(yǎng)皿在 5-6%CO 2 環(huán)境中溫?zé)嶂?/span> 37℃。同時(shí)準(zhǔn)備胚胎培養(yǎng)基的微滴,用于在診斷時(shí)進(jìn)行胚胎的洗滌和最終培養(yǎng)。
4.取預(yù)平衡的培養(yǎng)皿并將胚胎轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿的中間小液滴中。用活檢吸管吸取精子顯微操作液液滴,以避免胚胎粘附在移液管上。
5.執(zhí)行透明帶激光打孔操作。
6. 獲得透明帶小孔后,則使用取樣吸移管接近卵裂球。為了使質(zhì)量減少最小化,將一個(gè)或兩個(gè)最小的卵裂球進(jìn)行活檢并放置在相應(yīng)的活檢培養(yǎng)基小滴中。
7.活檢后立即將胚胎在幾滴/孔的囊胚培養(yǎng)基之間轉(zhuǎn)移來徹底洗滌胚胎。
8.最后將胚胎轉(zhuǎn)移到具有用預(yù)平衡的液體石蠟覆蓋的胚胎培養(yǎng)基的微滴/孔的新皿中。
9.將具有分離的卵裂球活檢皿,用于樣品制備。
10. 同樣的可進(jìn)行第五天的囊胚活檢。